1. Mikä on soluviljelmä?
Soluviljely tarkoittaa solujen poistamista eläimistä tai kasveista ja niiden kasvattamista suotuisassa keinotekoisessa ympäristössä.Solut voidaan ottaa suoraan kudoksesta ja hajottaa entsymaattisesti tai mekaanisin keinoin ennen viljelyä, tai ne voidaan johtaa vakiintuneista solulinjoista tai solulinjoista.
2. Mitä on peruskulttuuri?
Primääriviljelmä viittaa viljelyvaiheeseen sen jälkeen, kun solut on erotettu kudoksesta ja ne lisääntyvät sopivissa olosuhteissa, kunnes ne valtaavat kaikki saatavilla olevat substraatit (eli saavuttavat konfluenssin).Tässä vaiheessa solut on jatkoviljeltävä siirtämällä ne uuteen säiliöön tuoreella kasvualustalla, jotta saadaan lisää tilaa jatkuvalle kasvulle.
2.1 Solulinja
Ensimmäisen alaviljelmän jälkeen primääriviljelmää kutsutaan solulinjaksi tai alaklooniksi.Primääriviljelmistä johdettujen solulinjojen elinikä on rajallinen (eli ne ovat rajallisia; katso alla), ja niiden ohittaessa suurimman kasvukapasiteetin omaavat solut hallitsevat, mikä johtaa fenotyypin mukaiseen populaatioon tiettyyn genotyyppiin.
2.2 Solukanta
Jos solulinjan alapopulaatio valitaan viljelmästä positiivisesti kloonauksella tai jollain muulla menetelmällä, solulinjasta tulisi solukanta.Solukannat saavat yleensä lisää geneettisiä muutoksia sen jälkeen, kun emolinja alkaa.
3. Rajoitetut ja jatkuvat solulinjat
Normaalit solut jakautuvat yleensä vain rajoitetun määrän kertoja ennen kuin menettävät kykynsä lisääntyä.Tämä on geneettisesti määrätty tapahtuma, jota kutsutaan vanhenemiseksi;näitä solulinjoja kutsutaan äärellisiksi solulinjoiksi.Joistakin solulinjoista tulee kuitenkin kuolemattomia transformaatioksi kutsutun prosessin kautta, joka voi tapahtua spontaanisti tai kemikaalien tai virusten indusoima.Kun äärellinen solulinja käy läpi transformaation ja saavuttaa kyvyn jakautua loputtomiin, siitä tulee jatkuva solulinja.
4. Kulttuuritila
Kunkin solutyypin viljelyolosuhteet ovat hyvin erilaiset, mutta keinotekoinen ympäristö solujen viljelylle koostuu aina sopivasta säiliöstä, joka sisältää seuraavat:
4.1 Substraatti tai elatusaine, joka tarjoaa välttämättömiä ravintoaineita (aminohapot, hiilihydraatit, vitamiinit, kivennäisaineet)
4.2 Kasvutekijät
4.3 Hormonit
4.4 Kaasut (O2, CO2)
4.5 Säännelty fysikaalinen ja kemiallinen ympäristö (pH, osmoottinen paine, lämpötila)
Useimmat solut ovat kiinnittymispaikasta riippuvaisia ja niitä on viljeltävä kiinteällä tai puolikiinteällä substraatilla (tarttuva tai yksikerroksinen viljelmä), kun taas muut solut voivat kasvaa kellumassa väliaineessa (suspensioviljelmä).
5. Kylmäsäilytys
Jos alaviljelmässä on liikaa soluja, ne tulee käsitellä sopivalla suoja-aineella (kuten DMSO:lla tai glyserolilla) ja säilyttää alle -130°C:n lämpötilassa (kryosäilytys), kunnes niitä tarvitaan.Lisätietoja solujen jatkoviljelystä ja kylmäsäilönnästä.
6. Viljelmien solujen morfologia
Viljelmässä olevat solut voidaan jakaa kolmeen perusluokkaan niiden muodon ja ulkonäön (eli morfologian) perusteella.
6.1 Fibroblastisolut ovat bipolaarisia tai multipolaarisia, ne ovat muodoltaan pitkänomaisia ja kasvavat kiinnittyneenä substraattiin.
6.2 Epiteelin kaltaiset solut ovat monikulmion muotoisia, säännöllisemmän kokoisia ja ne on kiinnitetty matriisiin erillisinä levyinä.
6.3 Lymfoblastin kaltaiset solut ovat pallomaisia ja kasvavat yleensä suspensiossa kiinnittymättä pintaan.
7. Soluviljelmän soveltaminen
Soluviljely on yksi tärkeimmistä solu- ja molekyylibiologian työkaluista.Se tarjoaa erinomaisen mallijärjestelmän solujen normaalin fysiologian ja biokemian (kuten aineenvaihduntatutkimuksen, ikääntymisen), lääkkeiden ja myrkyllisten yhdisteiden vaikutusten soluihin sekä mutageneesin ja karsinogeenisten vaikutusten tutkimiseen.Sitä käytetään myös lääkeseulonnassa ja -kehityksessä sekä biologisten yhdisteiden (kuten rokotteiden, terapeuttisten proteiinien) laajamittaisessa valmistuksessa.Soluviljelmän käytön tärkein etu mihin tahansa näistä sovelluksista on tulosten johdonmukaisuus ja toistettavuus, jotka voidaan saada käyttämällä kloonattujen solujen erää.
Postitusaika: Jun-03-2019