Soluviljelmien kontaminaatiosta voi helposti tulla yleisin ongelma soluviljelylaboratorioissa, mikä joskus aiheuttaa erittäin vakavia seurauksia.Soluviljelmän kontaminantit voidaan jakaa kahteen luokkaan: kemialliset kontaminantit, kuten elatusaine, seerumi ja vesi, endotoksiinit, pehmittimet ja pesuaineet sekä biologiset kontaminantit, kuten bakteerit, homeet, hiivat, virukset, mykoplasmojen ristiininfektio.Muiden solulinjojen saastuttama.Vaikka kontaminaatiota on mahdotonta poistaa kokonaan, sen esiintymistiheyttä ja vakavuutta voidaan vähentää ymmärtämällä perusteellisesti sen lähde ja noudattamalla hyviä aseptisia tekniikoita
1.Tässä osiossa kuvataan tärkeimmät biologisen saastumisen tyypit:
Bakteerikontaminaatio
Homeen ja virusten saastuminen
Mykoplasman saastuminen
Hiivan saastuminen
1.1 Bakteerikontaminaatio
Bakteerit ovat suuri joukko kaikkialla esiintyviä yksisoluisia mikro-organismeja.Ne ovat yleensä vain muutaman mikronin halkaisijaltaan ja voivat olla eri muotoisia, palloista tankoihin ja spiraaleihin.Kaikkialla esiintyvänsä, kokonsa ja nopean kasvunsa vuoksi bakteerit, kuten hiivat ja homeet, ovat yleisimpiä biologisia kontaminantteja soluviljelmässä.
1.1.1 Bakteerikontaminaation havaitseminen
Bakteerikontaminaatio havaitaan helposti viljelmän silmämääräisellä tarkastuksella muutaman päivän kuluessa siitä, kun se on saanut tartunnan;
Infektoituneet viljelmät näyttävät yleensä sameilta (eli sameilta), joskus pinnalla on ohut kalvo.
Myös viljelyalustan pH:n äkillisiä pudotuksia kohdataan usein.
Pienitehoisessa mikroskoopissa bakteerit näyttävät pieniltä, liikkuvilta rakeina solujen välillä, ja tarkkailu tehokkaalla mikroskoopilla voi selvittää yksittäisten bakteerien muodot.
1.2 Homeen ja virusten saastuminen
1.2.1 Homeen kontaminaatio
Homeet ovat sienikunnan eukaryoottisia mikro-organismeja, jotka kasvavat monisoluisten filamenttien muodossa, joita kutsutaan hyfeiksi.Näiden monisoluisten filamenttien yhdistävät verkot sisältävät geneettisesti identtisiä ytimiä, joita kutsutaan pesäkkeiksi tai rihmastoiksi.
Samoin kuin hiivakontaminaatio, viljelmän pH pysyy vakaana kontaminaatiovaiheen alkuvaiheessa ja nousee sitten nopeasti, kun viljelmä saa vakavammin tartunnan ja muuttuu sameaksi.Mikroskoopin alla rihmasto on yleensä rihmamaista, joskus tiheänä itiörypäleinä.Monien homeiden itiöt voivat selviytyä äärimmäisen ankarissa ja epämiellyttävässä ympäristössä lepotilassa, ja ne aktivoituvat vain oikeanlaisissa kasvuolosuhteissa.
1.2.2 Viruskontaminaatio
Virukset ovat mikroskooppisia tartunnanaiheuttajia, jotka ottavat haltuunsa isäntäsolun lisääntymiskoneet.Niiden erittäin pieni koko vaikeuttaa niiden havaitsemista viljelmässä ja niiden poistamista soluviljelylaboratorioissa käytetyistä reagensseista.Koska useimmilla viruksilla on erittäin tiukat vaatimukset isäntilleen, ne eivät yleensä vaikuta haitallisesti muiden lajien kuin isännän soluviljelmiin.
Viruksen saastuttamien soluviljelmien käyttö voi kuitenkin aiheuttaa vakavan riskin laboratoriohenkilöstön terveydelle, varsinkin jos ihmisen tai kädellisen soluja kasvatetaan laboratoriossa.
Virusinfektio soluviljelmissä voidaan havaita elektronimikroskopialla, immunovärjäyksellä vasta-ainesarjalla, ELISA:lla tai PCR:llä sopivilla virusalukkeilla.
1.3 Mykoplasmakontaminaatio
Mykoplasmat ovat yksinkertaisia bakteereja, joilla ei ole soluseinämiä, ja niiden uskotaan olevan pienimpiä itsestään replikoituvia organismeja.Äärimmäisen pienen koonsa (yleensä alle 1 mikroni) vuoksi mykoplasmaa on vaikea havaita, kunnes ne saavuttavat erittäin suuren tiheyden ja aiheuttavat soluviljelmien huononemisen;Siihen asti ei yleensä ole ilmeisiä merkkejä infektiosta.
1.3.1 Mykoplasmakontaminaation havaitseminen
Jotkut hitaasti kasvavat mykoplasmat voivat säilyä viljelmissä aiheuttamatta solukuolemaa, mutta ne muuttavat isäntäsolujen käyttäytymistä ja aineenvaihduntaa viljelmissä.
Krooniselle mykoplasma-infektiolle voi olla tunnusomaista vähentynyt soluproliferaationopeus, vähentynyt saturaatiotiheys ja agglutinaatio suspensioviljelmässä.
Ainoa luotettava tapa havaita mykoplasmakontaminaatio on kuitenkin testata viljelmää säännöllisesti fluoresoivalla värjäyksellä (esim. Hoechst 33258), ELISA:lla, PCR:llä, immunovärjäyksellä, autoradiografialla tai mikrobitestauksella.
1.4 Hiivakontaminaatio
Hiivat ovat sienikunnan yksisoluisia eukaryootteja, joiden koko vaihtelee muutamasta mikronnista (yleensä) 40 mikroniin (harvoin).
1.4.1 Hiivakontaminaation havaitseminen
Kuten bakteerikontaminaation kohdalla, hiivan saastuttamat viljelmät voivat muuttua sameiksi, varsinkin jos kontaminaatio on pitkälle edennyt.Hiivalla saastuneiden viljelmien pH muuttuu hyvin vähän, kunnes saastuminen pahenee, jolloin pH yleensä nousee.Mikroskoopin alla hiiva näyttää yksittäisinä munamaisina tai pallomaisina hiukkasina ja voi tuottaa pienempiä hiukkasia.
2. Ristiinfektio
Vaikka monien solulinjojen laaja ristikontaminaatio HeLa:n ja muiden nopeasti kasvavien solulinjojen kanssa ei ole yhtä yleistä kuin mikrobikontaminaatio, on selkeästi määritelty ongelma, jolla on vakavia seurauksia.Hanki solulinjat hyvämaineisista solupankeista, tarkista säännöllisesti solulinjojen ominaisuudet ja käytä hyviä aseptisia tekniikoita.Nämä käytännöt auttavat sinua välttämään ristikontaminaation.DNA-sormenjäljet, karyotyypitys ja isotyypitys voivat vahvistaa, onko soluviljelmässäsi ristikontaminaatiota.
Vaikka monien solulinjojen laaja ristikontaminaatio HeLa:n ja muiden nopeasti kasvavien solulinjojen kanssa ei ole yhtä yleistä kuin mikrobikontaminaatio, on selkeästi määritelty ongelma, jolla on vakavia seurauksia.Hanki solulinjat hyvämaineisista solupankeista, tarkista säännöllisesti solulinjojen ominaisuudet ja käytä hyviä aseptisia tekniikoita.Nämä käytännöt auttavat sinua välttämään ristikontaminaation.DNA-sormenjäljet, karyotyypitys ja isotyypitys voivat vahvistaa, onko soluviljelmässäsi ristikontaminaatiota.
Postitusaika: 01.02.2023